तकनीकी डाटा
विलवणीकरण के लिए स्तंभों/प्लेटों के उपयोग के निर्देश c18
उत्पाद परिचय
C18 विलवणीकरण स्तंभ/प्लेट C18 सिलिका जेल मैट्रिक्स से भरे होते हैं, जिसके कार्यात्मक समूह, ऑक्टाडेसिल में उच्च हाइड्रोफोबिसिटी और गैर-ध्रुवीय यौगिकों के लिए उत्कृष्ट प्रतिधारण गुण होते हैं। C18 विलवणीकरण स्तंभ/प्लेट नमक प्रतिधारण के बिना DMT के साथ प्राइमर/ओलिगो/डीएनए अणुओं को अवशोषित कर सकते हैं, जिसके परिणामस्वरूप उच्च शुद्धता वाले प्राइमर/ओलिगो/डीएनए उत्पाद बनते हैं।
चयन गाइड
बीएम लाइफ साइंसेज विभिन्न आकारों में C18 विलवणीकरण कॉलम/प्लेट प्रदान करता है, और आप प्राइमर/ओलिगो सांद्रता के आधार पर सही विलवणीकरण कॉलम चुन सकते हैं। बैच प्रोसेसिंग के लिए, आप 96-वेल विलवणीकरण प्लेट चुन सकते हैं।
| उत्पाद संख्या | आदर्श | लागू ऑलिगोन्युक्लियोटाइड विनिर्देश | संदर्भ चरण |
| स्पेक18W150 | 50मिग्रा/1एमएल | 10एनएमओएल - 200एनएमओएल | चरण 5 |
| स्पेक18W3100 | 100मिग्रा/3एमएल | 10एनएमओएल - 600एनएमओएल | स्टेप 1 |
| स्पेक18W3300 | 300मिग्रा/3एमएल | 10एनएमओएल - 2 .opmol | चरण दो |
| स्पेक18W61000 | 1 ग्राम/6 एमएल | 1 उमोल - 6 उमोल | चरण 3 |
| स्पेक18W9630 | 30mg/96 वेल प्लेट | 5एनएमओएल - 100एनएमओएल | चरण 4 |
| स्पेक18W9650 | 50mg/96 वेल प्लेट | 10एनएमओएल - 200एनएमओएल | चरण 4 |
| एसपीई15सी18डब्लू9680 | 80mg/96-वेल प्लेट (1.5ml 96-वेल प्लेट) | 10एनएमओएल - 500एनएमओएल | चरण 5 |
| एसपीई23सी18डब्लू9680 | 80 मिलीग्राम / 96 वेल प्लेट (2.3 मिलीलीटर 96 वेल प्लेट) | 10एनएमओएल - 500एनएमओएल | चरण 5 |
टिप्पणी
C18 क्लीनिंग कॉलम/प्लेट HPLC और PAGE शुद्धिकरण के बाद कच्चे उत्पाद और प्राइमर/ओलिगो को भी विलवणीकृत कर सकता है, विवरण के लिए चरण 5 देखें।
अभिकर्मक
एसीटोनिट्राइल क्रोमैटोग्राफिक ग्रेड
0.1 एम चाय, पीएच7.0
0.5 एम NaCl
फ्लशिंग समाधान (0.5 एम Nacl में 5% एसिटोनाइट्राइल घुला हुआ)
3% ट्राइफ्लुओरोएसिटिक एसिड (TFA)
विआयनीकृत जल
20% एसीटोनिट्राइल
TE बफर: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8.0
स्टेप 1
नमूना तैयार करना
ऑलिगोन्युक्लियोटाइड नमूने में 2 एमएल की मात्रा में 0.5 एम NacI मिलाएं।
अलवणीकरण स्तंभ को सक्रिय करना
सक्रियण: स्तंभ को सक्रिय करने के लिए 1 एमएल एसिटोनाइट्राइल का उपयोग किया गया।
संतुलन: 0.1 एम टीईएए समाधान (पीएच 7.0) के 1 एमएल के साथ स्तंभ को संतुलित करें।
सफाई प्रक्रिया
1. 2 एमएल ऑलिगोन्युक्लियोटाइड युक्त विलयन को विलवणीकरण स्तंभ से गुजारें।
2. असफल अनुक्रमों को हटाने के लिए कॉलम को 1 एमएल फ्लशिंग घोल से 2 बार धोएं।
3. लवणों को हटाने के लिए स्तंभ को 1 मिली विआयनीकृत जल से 2 बार धोएँ।
4. डीएमटी को हटाने के लिए कॉलम को 3% ट्राइफ्लुओरोएसेटिक एसिड के 1 मिली से 2 बार धोएं और देखें कि अवशोषित परत नारंगी-लाल हो जाती है; और
5. ट्राइफ्लुओरोएसिटिक एसिड और अवशिष्ट लवणों को हटाने के लिए विलवणीकरण स्तंभ को 1 एमएल विआयनीकृत जल से दो बार धोएं।
6. 20% एसिटोनिट्राइल का 1ml निकालें और एकत्र करें।
चरण दो
नमूना तैयार करना
ऑलिगोन्युक्लियोटाइड नमूने में 0.5 M NacI को 4 mL की मात्रा में मिलाएं।
अलवणीकरण स्तंभ को सक्रिय करना
सक्रियण: स्तंभ को सक्रिय करने के लिए 2 एमएल एसिटोनाइट्राइल का उपयोग किया गया।
संतुलन: 0.1 एम टीईएए (पीएच 7.0) के साथ 2 एमएल कॉलम को संतुलित करें।
सफाई प्रक्रिया
1. 4 एमएल ऑलिगोन्युक्लियोटाइड युक्त विलयन को विलवणीकरण स्तंभ से गुजारें।
2. असफल अनुक्रमों को हटाने के लिए कॉलम को 2 मिलीलीटर फ्लशिंग घोल से 2 बार धोएं।
3. लवणों को हटाने के लिए स्तंभ को 2 मिलीलीटर विआयनीकृत जल से 2 बार धोएँ ;)
4. डीएमटी को हटाने के लिए कॉलम को 3% ट्राइफ्लुओरोएसेटिक एसिड के 2 मिलीलीटर से 2 बार धोएं, अवशोषण परत नारंगी-लाल हो गई है।
5. ट्राइफ्लुओरोएसिटिक एसिड और अवशिष्ट लवणों को हटाने के लिए कॉलम को 2 एमएल विआयनीकृत पानी से दो बार धोएं।
6. 20% एसिटोनिट्राइल की 2ml मात्रा निकालें और एकत्र करें।
चरण 3
नमूना तैयार करना
ऑलिगोन्युक्लियोटाइड नमूने में 10 एमएल की मात्रा में 0.5 एम नैक मिलाएं।
अलवणीकरण स्तंभ को सक्रिय करना
सक्रियण: स्तंभ को सक्रिय करने के लिए 5 एमएल एसिटोनाइट्राइल का उपयोग किया गया।
संतुलन: स्तंभ को 0.1 m TEAA (PH 7.0) के 10 mL के साथ संतुलित किया गया।
सफाई प्रक्रिया
1. ऑलिगोन्युक्लियोटाइड युक्त 10 एमएल घोल को विलवणीकरण स्तंभ से गुजारा गया।
2. असफल अनुक्रमों को हटाने के लिए कॉलम को 5 एमएल फ्लशिंग घोल से दो बार धोया गया।
3. लवणों को हटाने के लिए स्तंभ को 5 मिली लीटर विआयनीकृत जल से दो बार धोएँ।
4. डीएमटी को हटाने के लिए कॉलम को 5 एमएल 3% ट्राइफ्लुओरोएसेटिक एसिड से दो बार धोएं और देखें कि अवशोषण परत नारंगी-लाल हो गई है।
5. ट्राइफ्लुओरोएसिटिक एसिड और नमक के अवशेषों को हटाने के लिए कॉलम को 5 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी से दो बार धोएं।
6. 20% एसिटोनाइट्राइल की 5 मिली मात्रा निकालें और एकत्र करें।
चरण 4
नमूना तैयार करना
ऑलिगोन्युक्लियोटाइड नमूने में 0.5 mL की मात्रा में 0.5 M Nacl मिलाएं।
96-वेल प्लेट सक्रियण
सक्रियण: 0.5 एमएल एसिटोनाइट्राइल को 96-वेल प्लेट के प्रत्येक वेल से गुजारा गया।
संतुलन: 96-वेल प्लेट को 0.1 एम टीईएए समाधान (पीएच 7.0) के 0.5 एमएल के साथ संतुलित करें।
सफाई प्रक्रिया
1. 0.5 एमएल ऑलिगोन्युक्लियोटाइड युक्त विलयन को 96 वेल प्लेट से गुजारें।
2. खराब अनुक्रमों को हटाने के लिए 96-वेल प्लेट को 0.5 एमएल वॉश समाधान के साथ 2 बार कुल्ला करें।
3. लवणों को हटाने के लिए 96-वेल प्लेट को 0.5 एमएल विआयनीकृत जल से 2 बार धोएँ।
4. डीएमटी हटाने के लिए 96-वेल प्लेट को 0.5 मिली 3% ट्राइफ्लुओरोएसेटिक एसिड से 2 बार धोएं, और देखें कि अवशोषण परत नारंगी-लाल हो जाती है; और
5. ट्राइफ्लुओरोएसिटिक एसिड और नमक के अवशेषों को हटाने के लिए 96-वेल प्लेट को 0.5 एमएल विआयनीकृत पानी से दो बार धोएं।
6. 20% एसिटोनाइट्राइल का 0.5 मिलीलीटर निकालें और सामग्री एकत्र करें।
चरण 5
नमूना तैयार करना
ऑलिगोन्युक्लियोटाइड नमूने में 1.2/2 mL की मात्रा में 0.5 M Nacl मिलाएं।
96-वेल प्लेट सक्रियण
सक्रियण: 96-वेल प्लेट के प्रत्येक वेल से 1-4 मिली 0. 5 एमएल एसिटोनाइट्राइल छोड़ें।
संतुलन: 96-वेल प्लेट को 0.1 एम टीईएए समाधान (पीएच 7.0) के 0.5 एमएल के 1-4 एमएल के साथ संतुलित करें।
सफाई प्रक्रिया
1. 0.5-2 एमएल ऑलिगोन्युक्लियोटाइड युक्त घोल को 96-वेल प्लेट से गुजारें।
2. दुर्भाग्यपूर्ण अनुक्रमों को हटाने के लिए 96-वेल प्लेट को 1/2 एमएल वॉश समाधान के साथ 2 बार कुल्ला करें ;)
3. लवणों को हटाने के लिए 96-वेल प्लेट को 1/2 एमएल विआयनीकृत जल से दो बार धोएँ।
4. डीएमटी को हटाने के लिए 96-वेल प्लेट को 1/2 मिलीलीटर 3% ट्राइफ्लुओरोएसेटिक एसिड से 2 बार धोएं, और देखें कि अवशोषण परत नारंगी-लाल हो जाती है;
5. ट्राइफ्लुओरोएसिटिक एसिड और नमक के अवशेषों को हटाने के लिए 96-वेल प्लेट को 1/2 एमएल विआयनीकृत पानी से 2 बार धोएँ।
6. 20% एसिटोनाइट्राइल का 1/2ml निकालें और सामग्री एकत्र करें।
चरण 6
अभिकर्मक
एसीटोनिट्राइल क्रोमैटोग्राफिक ग्रेड
0.05 एम चाय, पीएच 7.0
2 एम टीईए, पीएच 7.0
विआयनीकृत जल (RNase के बिना RNA अणुओं के विलवणीकरण और शुद्धिकरण के लिए) 60% एसिटोनिट्राइल (0.5% NH4OH युक्त जल में घुला हुआ)
20% एसिटोनाइट्राइल (डीप्रोटेक्शन के बाद डीएनए या आरएनए अणुओं को विलवणीकरण करने के लिए)
TE बफर: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8.0
नमूना तैयार करना
HPLC-शुद्ध ऑलिगो: HPLC-शुद्ध ऑलिगो में 0.1 M TEAA की उचित मात्रा डालें ताकि अंतिम एसिटोनाइट्राइल सांद्रता ≤5% हो। शुद्ध ऑलिगो: ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड युक्त जेल के टुकड़ों को 0.05 M TEAA में घोलें, जेल के टुकड़ों को हटाएँ, ऑलिगो को 0.1 M TEAA के कम से कम 2 mL में घोलें।
NH4OH या AMA में घुले ओलिगोस: सूखने तक वाष्पित करें और 0.1 M TEAA के 2 mL में घोलें।
विलवणीकरण पम्प को सक्रिय करना
सक्रियण: स्तंभ को सक्रिय करने के लिए 1 एमएल एसिटोनाइट्राइल का उपयोग किया गया।
संतुलन: 1 एमएल 2 एम टीईएए स्तंभ (पीएच 7.0) को संतुलित करें।
एचपीएलसी शुद्धिकरण के लिए ओलिगोस विलवणीकरण प्रक्रिया
1. ऑलिगोन्युक्लियोटाइड युक्त विलयन को विलवणीकरण स्तंभ से गुजारें।
2. लवणों को हटाने के लिए विलवणीकरण स्तंभ को 1 एमएल विआयनीकृत जल से दो बार धोएँ।
3. 60% एसिटोनाइट्राइल के 1 मिलीलीटर के कॉलम के माध्यम से निकालें और एकत्र करें।
ओलिगोस विलवणीकरण प्रक्रिया को PAAG विधि द्वारा शुद्ध किया गया
1. ऑलिगोन्युक्लियोटाइड युक्त विलयन को विलवणीकरण स्तंभ से गुजारें।
2. लवणों को हटाने के लिए विलवणीकरण स्तंभ को 1 एमएल विआयनीकृत जल से दो बार धोएँ।
3. 60% एसिटोनाइट्राइल के 1 मिलीलीटर के कॉलम के माध्यम से निकालें और एकत्र करें।
संश्लेषण के बाद डीएनए ऑलिगॉन को विलवणित करने की प्रक्रिया
1. ऑलिगोन्युक्लियोटाइड युक्त घोल को विलवणीकरण स्तंभ से गुजारें; और
2. असफल अनुक्रमों को हटाने के लिए 1 एमएल 0.1 एम टीईएए कॉलम को दो बार धोएं।
3. लवणों को हटाने के लिए विलवणीकरण स्तंभ को 1 मिलीलीटर विआयनीकृत जल से दो बार धोएँ।
4. कॉलम को 20% एसिटोनाइट्राइल के 1 मिलीलीटर से गुजारें और इकट्ठा करें।
संश्लेषण के बाद आरएनए ओलिगोस विलवणीकरण प्रक्रिया
1. ऑलिगोन्युक्लियोटाइड युक्त विलयन को विलवणीकरण स्तंभ से गुजारें।
2. कॉलम को 2 मिली 0. 1 एम टीईएए से धो लें।
3. कॉलम को 2 एमएल RNase-मुक्त पानी से धोएँ।
4. 20% एसिटोनाइट्राइल (RNase-मुक्त जल) की 2ml मात्रा को एक कॉलम में डालें, निकालें और एकत्र करें। ओलिगोन्यूक्लियोटाइड भंडारण
20% एसिटोनाइट्राइल में घुले और 4°C पर भंडारित ओलिगोन्यूक्लियोटाइड सूक्ष्मजीवों की वृद्धि को रोकते हैं और अल्पकालिक भंडारण के लिए उपयुक्त होते हैं।
20% एसिटोनाइट्राइल घोल में (या TE जैसे क्षारीय बफर में घुले हुए) ओलिगोन्युक्लियोटाइड्स को -20 °C जैसे कम तापमान पर लंबे समय तक भंडारित किया जा सकता है।
लाइओफिलाइज्ड पाउडर के रूप में ओलिगोन्युक्लियोटाइड्स को लम्बे समय तक भंडारित किया जा सकता है।
चेतावनी
प्रयुक्त अभिकर्मकों की मात्राएं केवल सिफारिशें हैं और प्रत्येक विशिष्ट मामले में इन्हें अनुकूलित किया जाना चाहिए।
प्रयुक्त अभिकर्मकों की मात्राएं केवल सिफारिशें हैं और इन्हें मामला-दर-मामला आधार पर अनुकूलित किया जाना चाहिए।
विलवणीकरण स्तंभ को स्तंभ/प्लेट पर अवशेषों को निकालने और स्तंभ/विलवणीकरण प्लेट की बंधन क्षमता में सुधार करने के लिए पर्याप्त सक्रियण संतुलन से गुजरना चाहिए। संश्लेषित ऑलिगोन्युक्लियोटाइड्स का नमूना धीरे-धीरे किया जाना चाहिए ताकि सफाई और क्रॉस-संदूषण के लिए सीपीजी पाउडर को स्तंभ/प्लेट में प्रवेश करने से रोका जा सके।
C18 विलवणीकरण कॉलम/वेफर्स सिलिका मैट्रिक्स का उपयोग करते हैं, लागू PH रेंज 2-7 है, PH > 7.5 आसानी से सिलिका मैट्रिक्स को घोल देता है, PH
डीएमटी को विलवणीकरण करने के लिए टीएफए का उपयोग करते समय, समय पर ध्यान दें, अधिक समय लगने पर प्यूरीन हट जाएगा।
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बी एंड एम यूनिवर्सल सीपीजी फ्रिट्स आयातित अल्ट्रा-उच्च आणविक भार अल्ट्रा-शुद्ध पॉलीथीन और आयातित सीपीजी पाउडर से बने होते हैं, जो विशेष तकनीक द्वारा संसाधित होते हैं, संश्लेषण कॉलम, कम उत्परिवर्तन दर और विश्वसनीय उत्पाद की गुणवत्ता में एक अच्छा संश्लेषण प्रभाव होता है।
डॉ.ओलिगो/मर्मेड श्रृंखला सिंथेसाइज़र में संश्लेषण पूरा हो जाने और अमोनिया घुल जाने के बाद, ओलिगो को सीधे संश्लेषण स्तंभ में निकाला जा सकता है, और खुराक और जल निकासी के बाद, इसे अतिरिक्त शुद्धिकरण चरणों के बिना सीधे नियमित पीसीआर प्रतिक्रिया के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, जो संचालित करने के लिए सुविधाजनक है, लागत बचाता है और तेजी से वितरण करता है!
ऑपरेशन के विशिष्ट चरण इस प्रकार हैं:
1, संश्लेषण बी एंड एम यूनिवर्सल सीपीजी फ्रिट्स सिंथेटिक कॉलम / प्लेट्स / एस 400ul, 75% एसिटोनिट्राइल अल्ट्राप्योर पानी का मिश्रण सिंथेटिक अवशिष्ट अभिकर्मकों को हटाने के लिए दो बार धोया गया;
2, बी एंड एम यूनिवर्सल सीपीजी फ्रिट्स सिंथेटिक अमोनिया अम्मोलिसिस कॉलम/प्लेट्स, 90°C, 80PSI, अमोनिया अम्मोलिसिस 2-2.5 घंटे;
3, 100% एसीटोनिट्राइल 400L वॉश सिंथेटिक कॉलम/प्लेट, दो बार;
4、90% एसीटोनिट्राइल अल्ट्राप्योर वाटर ब्लेंड 400ul वॉशिंग सिंथेटिक कॉलम/प्लेट, दो बार, पम्पिंग ड्राई;
5、सिंथेटिक कॉलम/प्लेट पर प्राइमरों को निकालने के लिए उपयुक्त मात्रा में एलुएंट, एलुएंट अतिशुद्ध जल हो सकता है, 3% ट्राइएथिलमाइन अतिशुद्ध जल मिश्रण हो सकता है, लगभग 20% एसिटोनिट्राइल अतिशुद्ध जल मिश्रण भी हो सकता है।
6. निक्षालन समाधान को मापा जा सकता है, वितरित किया जा सकता है, सूखाया जा सकता है, पैक किया जा सकता है और भेजा जा सकता है।